蝦池藍(lán)藻群落及微囊藻毒素對(duì)凡納濱對(duì)蝦相關(guān)免疫酶影響.pdf

1、在對(duì)蝦養(yǎng)殖中后期，由于大量的投入人工飼料，養(yǎng)殖水體出現(xiàn)有機(jī)污染和富營(yíng)養(yǎng)化狀態(tài)，低鹽度的蝦池常會(huì)導(dǎo)致藍(lán)藻大量繁殖而形成水華，產(chǎn)生的毒素阻礙對(duì)蝦的生長(zhǎng)。通過(guò)野外調(diào)查和毒性脅迫實(shí)驗(yàn)，探究水中藍(lán)藻數(shù)量與水質(zhì)因子和藍(lán)藻產(chǎn)毒量（微囊藻毒素，MC-LR）的關(guān)系，不同氮濃度、磷濃度和氮磷比對(duì)顫藻(Oscillatoriasp.)生長(zhǎng)和產(chǎn)毒的影響，以及MC-LR對(duì)凡納濱對(duì)蝦（Litopenaeus Vannamei）免疫酶及相關(guān)的基因表達(dá)量的影響。主要結(jié)

2、果如下：
　　1.通過(guò)對(duì)蝦池進(jìn)行連續(xù)采樣分析，發(fā)現(xiàn)蝦池中的藍(lán)藻主要有螺旋藻(Spirulinasp.)，魚(yú)腥藻(Anabaena sp.)，顫藻（Oscillatoria sp.）、銅綠微囊藻（Microcystisaeruginosa）等，其中鹽澤螺旋藻的優(yōu)勢(shì)度為0.53～0.73。藍(lán)藻是水體中的優(yōu)勢(shì)微藻種群，藍(lán)藻總數(shù)占微藻總數(shù)的88％～99％，藍(lán)藻細(xì)胞數(shù)為0.99×109～5.89×109 cell/L。蝦池微藻多樣性指數(shù)(H

3、')為1.16～2.49，養(yǎng)殖水體處于中度污染狀態(tài)。溶解性無(wú)機(jī)氮的含量是0.13～2.30mg/L，正磷酸鹽含量是0.25～2.39mg/L，化學(xué)需氧量的含量1.94～13.79mg/L。WC-LR在水中含量為0.18μg/L～0.79μg/L。根據(jù)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，藍(lán)藻總數(shù)與化學(xué)需氧量之間呈顯著的正相關(guān)關(guān)系。表明低鹽度的富營(yíng)養(yǎng)化的水體能促進(jìn)藍(lán)藻的生長(zhǎng)，成為微藻群落中的優(yōu)勢(shì)種群。
　　2.設(shè)置不同氮、磷濃度和氮磷比來(lái)測(cè)定營(yíng)養(yǎng)鹽對(duì)

4、顫藻生長(zhǎng)和產(chǎn)毒能力的影響。發(fā)現(xiàn)在不同氮濃度實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)?shù)獫舛取?5.0mg/L時(shí)，能促使顫藻的細(xì)胞數(shù)量、葉綠素a含量、藻膽蛋白含量、顫藻對(duì)水體中氮的吸收利用和毒素含量提高;在不同磷濃度實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)磷濃度≥1.0mg/L時(shí)，使顫藻的細(xì)胞數(shù)量、葉綠素a含量、藻膽蛋白含量和顫藻對(duì)水體中磷的吸收利用提高，但卻降低毒素含量;在不同氮磷比實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)?shù)妆取?5∶1時(shí)，使顫藻的細(xì)胞數(shù)量、葉綠素a含量、藻膽蛋白含量、顫藻對(duì)水體中氮的吸收利用和毒素含量提高。

5、結(jié)果表明水體中營(yíng)養(yǎng)鹽濃度和比例的變化能顯著影響顫藻生長(zhǎng)和產(chǎn)毒能力。
　　3.在急性染毒實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)往凡納濱對(duì)蝦體內(nèi)注射MC-LR，發(fā)現(xiàn)MC-LR能顯著影響凡納濱對(duì)蝦肝胰臟的免疫相關(guān)酶活力(P＜0.05)。隨著時(shí)間增加，超氧化歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化酶、過(guò)氧化物酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和溶菌酶的酶活力呈先增加后減小的變化趨勢(shì)。超氧化歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化酶和過(guò)氧化物酶在染毒后4h達(dá)到峰值，分別為123.08 U/mg、59.62 U

6、/mg和29.95 U/mg，比對(duì)照組分別增加了15.62％、18.76％和32.86％;而酸性磷酸酶和堿性磷酸酶酶活力在染毒2h即顯著增加，分別為181.76 U/mg和157.90 U/mg，比對(duì)照組分別增加了25.02％和37.99％;溶菌酶在染毒8h達(dá)到最大值，為28.80 U/mg，比對(duì)照組增加了33.57％。表明高劑量的MC-LR能顯著抑制凡納濱對(duì)蝦的免疫酶活力。
　　4.在亞慢性染毒實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)往水體中釋放不同濃度的

7、MC-LR，30d后發(fā)現(xiàn)MC-LR能顯著影響凡納濱對(duì)蝦肝胰臟的免疫相關(guān)酶活力及基因表達(dá)量(P＜0.05)。超氧化歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化酶、過(guò)氧化物酶活力均隨著毒素濃度的增加而逐漸增大，毒素濃度為3.0μg/L時(shí)達(dá)到最大值，分別為250.40 U/mg、125.11 U/mg和7.42U/mg。酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活力呈先增加后減小的變化趨勢(shì)，當(dāng)毒素濃度為0.72μg/L時(shí)達(dá)到最大值，分別為76.97 U/mg和91.56 U/mg。當(dāng)

8、毒素濃度大于0.50μg/L時(shí)，溶菌酶活力隨著毒素濃度的增加而呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，毒素濃度為1.47μg/L時(shí)達(dá)到最小值，為9.69 U/mg。隨著毒素濃度的增加，超氧化歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化酶基因表達(dá)水平顯著上調(diào)，溶菌酶基因表達(dá)水平顯著下調(diào)，與相應(yīng)的酶活力變化相一致。表明水體中長(zhǎng)期的低濃度的MC-LR能引起凡納濱對(duì)蝦的應(yīng)激反應(yīng)，促使對(duì)蝦對(duì)免疫酶及相關(guān)基因進(jìn)行調(diào)節(jié)以應(yīng)對(duì)毒素的刺激。
　　以上結(jié)果表明，低鹽度蝦池的富營(yíng)養(yǎng)化程度的提高會(huì)促