褪黑素對癲癇大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、目的：馬桑內(nèi)酯建立大鼠癲癇模型、褪黑素進行干預(yù)，探討褪黑素（melatonin； MT）對癲癇腦損傷海馬氧化應(yīng)激以及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及其腦損傷保護的可能機制。 方法：成年雄性SD大鼠72只隨機分為對照組（18只）（control group）、模型組（18只）（model group）和治療組（36只）（treatment group），其中治療組又分為褪黑素高劑量組（18只）（MT low-dose group）和褪黑素低劑

2、量組（18只）（MT high-dose group）。模型組作馬桑內(nèi)酯（coriaria lactone；CL）側(cè)腦室（lateral ventricle；LV）微量注射（50μg/kg體重），治療組于造模成功后60min分別腹腔注射褪黑素（高劑量組10mg/kg、低劑量組5 mg/kg），5～15分鐘內(nèi)觀察到癲癇發(fā)作。癲癇發(fā)作程度參照Racine（0～Ⅴ級）評級標(biāo)準(zhǔn)。達(dá)到Ⅲ級改變以上定為癲癇發(fā)作，癇性發(fā)作持續(xù)超過30 min為致癇成

3、功。對照組大鼠給予側(cè)腦室（50μg/kg）、腹腔（10mg/kg）注射同等劑量的生理鹽水。所有大鼠連續(xù)觀察7天，凡癲癇持續(xù)時間未達(dá)到預(yù)定要求或中途死亡的大鼠從本實驗中排除。模型組及治療組均觀察到癲癇發(fā)作Ⅲ級及其以上，致癇成功，對照組未見發(fā)作。7天后，每組18只大鼠中的2只大鼠立即斷頭取海馬組織勻漿、離心后進行紫外分光光度計檢測丙二醛（malondialdehyde； MDA）的含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutas

4、e； SOD）的活力。每組中剩余16只以4%多聚甲醛灌注固定后取海馬，其中8只大鼠的海馬組織以常規(guī)石蠟包埋切片，片厚5μm，采用原位末端標(biāo)記法（TUNEL法）檢測大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡；另外8只大鼠的海馬CA3區(qū)組織用電鏡觀察海馬CA3區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變。 結(jié)果：1．模型組海馬SOD活力顯著低于對照組，有顯著性差異（P<0．05）；褪黑素低、高劑量組海馬SOD活力顯著高于模型組，且高劑量組的SOD活力優(yōu)于低劑量組，有顯著

5、性差異（P<0．05）：而高劑量組與對照組則無顯著性差異（P>0．05）；模型組、褪黑素高、低劑量組大鼠海馬MDA含量均較對照組增高，有顯著性差異（P<0．05）；與褪黑素低、高劑量組相比，模型組大鼠海馬MDA水平升高，有顯著性差異（P<0．05）；且高劑量組的MDA含量低于低劑量組，有顯著性差異（P<0．05）。2．TUNEL染色結(jié)果：正常對照組僅見少量神經(jīng)細(xì)胞凋亡，呈現(xiàn)核固縮的形態(tài)學(xué)改變；與對照組相比，模型組可見大量凋亡細(xì)胞，主要表

6、現(xiàn)為核固縮，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，有顯著性差異（P<0．05）；與模型組、對照組相比，褪黑素高、低劑量組凋亡細(xì)胞均顯著減少，陽性反應(yīng)強度亦明顯減弱，核固縮現(xiàn)象減少，有顯著性差異（P<0．05）。3．超微結(jié)構(gòu)：正常海馬神經(jīng)元核大而圓，核仁明顯；核周邊線粒體等細(xì)胞器豐富。與對照組相比，模型組海馬區(qū)錐體細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)有明顯改變，表現(xiàn)為細(xì)胞核發(fā)生變形、固縮，在核膜的內(nèi)表面，染色質(zhì)固縮并碎裂成靠近核膜的碎片，形成數(shù)個較為密集的斑塊，核膜不清晰；線粒體

7、腫脹、嵴斷裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，成片層狀；部分胞漿和線粒體空泡化。褪黑素低劑量組胞質(zhì)中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張，線粒體輕度腫脹。褪黑素高劑量組神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，核膜基本清晰，無染色質(zhì)聚集；胞質(zhì)內(nèi)有少許水腫空白區(qū)，線粒體大致正常。 結(jié)論：1．在馬桑內(nèi)酯所致大鼠癲癇模型中，褪黑素抑制MDA水平、增強SOD活力，增加機體對氧化應(yīng)激反應(yīng)的能力，可能是癲癇發(fā)作及褪黑素保護的機制之一。2．神經(jīng)細(xì)胞凋亡及神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的改變是在癲癇發(fā)作及褪黑素保護中的