Khat誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：Khat是一種從阿拉伯茶樹(shù)中提取出的有機(jī)物,可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡,本研究在細(xì)胞和動(dòng)物水平初步探討Khat誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的作用及其分子機(jī)制。
　　方法：體外試驗(yàn),不同濃度Khat在不同時(shí)間點(diǎn)處理HepG2細(xì)胞株,采用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,FC)和Hoechst33258染色等檢測(cè)Khat誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞凋亡,采用Westren blot法檢測(cè)活性caspaes-3和caspase-9的

2、蛋白表達(dá)水平。體內(nèi)試驗(yàn),制備裸鼠皮下人肝癌(HepG2細(xì)胞)種植瘤模型,采用兩種濃度Khat進(jìn)行干預(yù),觀察Khat對(duì)裸鼠成瘤和裸鼠生存率的影響,并采用TUNEL染色檢測(cè)瘤細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：Khat在濃度為100～400ug/ml系列范圍內(nèi),在不同時(shí)間點(diǎn)4h、8h、16h及24h處理HepG2細(xì)胞,細(xì)胞增殖抑制率曲線隨Khat作用時(shí)間延長(zhǎng)而相應(yīng)升高。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示:200μg/ml Khat作用HepG2細(xì)胞4h、8

3、h和24h,凋亡率分別為6.2±1.5％、15.5±2.1％、33.5±4.1％。Khat作用于HepG2細(xì)胞24h后誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生明顯的凋亡形態(tài)學(xué)變化。Khat處理組活性caspase-3和caspase-9蛋白表達(dá)均明顯升高,caspase-9抑制劑Z-LEHD-FMK在20μM終濃度可完全阻遏Khat誘導(dǎo)的caspase-9的活性改變,同時(shí)部分阻遏caspase-3的活性,與對(duì)照組相比,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。分別采用