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1、廈門(mén)大學(xué)碩士學(xué)位論文尼崎青霉菌葡萄糖氧化酶的分離純化及性質(zhì)研究姓名:張茜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:石艷20090501尼崎青霉菌葡萄糖氧化酶的分離純化與性質(zhì)研究AbstractGlucoseoxidase(GOD,EC1134)hasgreatapplicationinthefieldsoffood、medicineandbiologyetcThisresearchestablishedasetofmetho
2、dtoextractandpuritytheglucoseoxidasefromPenicilliumamagasakienseWeresearchdifferenttime、temperature、stirringspeedanddifferentconcentrationofCa2、Tween80ontheGODactivityunitsfromfermentationliquorUndertheconsditionof24℃、20
3、0rpm、fermentationfor6days、03mol/LofCa2、3%ofTween80,thetotalGODactivityfromfermentationliquoraretomaximize。After6daysfermentation,themyceliumwasdestroyedtowithdrawtheintracellularglucoseoxidasewithbuffersolutionwhilethefe
4、rmentationliquorwastheextracellularglucoseoxidaseThenfermentationliquorbytheconcentration,50mmol/L啊s—HClbuffer(pH80)dialysistopH80,thechromatographyonDEAE32,thenbygelfiltrationthroughSephacrylS200Thepurifiedenzymewasasin
5、glebandonpolyacrylamidegelelectrophoresisandthespecificactivityWasdeterminedtobe472U/mgThesubunitofenzymewasdeterminedtobe75kD111eoptimumpHis56,andtheoptimumtemperatureis40℃fortheoxidaseofglucoseUndertheconditionofpH70,3
6、7℃,MchaelisMentencontant(脅)is1226mmol/L,andthemaximumvelocity(Vmlis2552Itmol/(Lmin)TheenzymeisstableinrangeofpHfrom55to85andintemperaturebelow50℃Theenzyme(GOD)wasmodifiedrespectivelybyseveralchemicalmodificationreagents,
7、Theresultsshowedthattheresiduesofhistidine,tryptophanandLarginineguanidinewerenecessaryfortheenzymeactivitywhiletheresiduesofmercapto,disulfidebond,Sulfide,serinedeformitycarboxylofacidicaminoacidslysinewerenotnecessaryf
8、ortheenzymeactivityTheinactivationeffectsinchemicalmodificationreagents(BrAc、NBS、acetylacetone)havebeenstudiedusingthekineticmethodofLineweaverBurkplotTheinhibitionconstantS(K1)ofBrAe,NBSandacetylacetoneare265、192、735mmo
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