仔豬早期斷奶應(yīng)激誘導肝臟發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其營養(yǎng)調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，仔豬早期斷奶是提高母豬生產(chǎn)力的關(guān)鍵技術(shù)之一，但早期斷奶措施會對仔豬生理和心理產(chǎn)生影響，進而導致早期斷奶應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細胞中蛋白質(zhì)加工和Ca2+貯存的主要場所，對應(yīng)激原的刺激十分敏感，當各種應(yīng)激原作用于細胞時，可誘導細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對于增強細胞對損傷的抵抗及適應(yīng)能力具有重要意義。因此，仔豬早期斷奶應(yīng)激是否會誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)生及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在早期斷奶應(yīng)激過程中的作用還有待進一步的研究。
　　本試驗內(nèi)容主要包

2、括以下三個部分:1.研究仔豬早期斷奶應(yīng)激是否會誘導肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生;2.研究HepG2細胞在不同營養(yǎng)素缺失培養(yǎng)條件下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生及其營養(yǎng)調(diào)節(jié);3.用不同亮氨酸添加水平(亮氨酸含量分別為1.66％、2.1％和2.44％)日糧飼喂早期斷奶仔豬，研究亮氨酸對仔豬早期斷奶應(yīng)激誘導的肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)節(jié)作用。
　　本研究結(jié)果顯示:1.運用透射電鏡觀察14日齡開始斷奶的大白豬仔豬肝臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)時發(fā)現(xiàn)，與對照組（未斷奶仔豬）相比，早期斷奶

3、仔豬在15日齡時肝臟內(nèi)開始有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張現(xiàn)象，在16日齡時肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張程度加深;運用Western blot技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，早期斷奶仔豬在15日齡時，肝臟細胞核中未折疊蛋白反應(yīng)關(guān)鍵蛋白XBP1的表達量升高(P＜0.05)，在18日齡時，肝臟細胞核內(nèi)XBP1表達量升高(P＞0.05)，表明早期斷奶仔豬肝臟中發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;2.運用Western blot技術(shù)檢測EBSS、低葡萄糖、無葡萄糖、無亮氨酸和無氨基酸培養(yǎng)基處理后的H

4、epG2細胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達量發(fā)現(xiàn)，EBSS處理能使細胞核內(nèi)的ATF4表達量顯著升高(P＜0.05);低葡糖糖處理時，細胞質(zhì)內(nèi)的ATF4表達量顯著升高(P＜0.05)，細胞核內(nèi)的ATF4表達量極顯著升高(P＜0.01);無葡萄糖處理的HepG2細胞的細胞質(zhì)和細胞核中ATF4均顯著升高(P＜0.05)，細胞質(zhì)中的ATF6α和CHOP表達量也顯著升高(P＜0.05);無亮氨酸處理時，細胞質(zhì)中XBP1的表達量顯著降低(P＜0.05)，

5、CHOP的表達量顯著升高(P＜0.05)，細胞核中ATF4和ATF6α的表達量也顯著升高(P＜0.05);無氨基酸處理時細胞質(zhì)中的CHOP表達量顯著升高(P＜0.05)，細胞核中的ATF4表達量也顯著升高(P＜0.05)。試驗結(jié)果表明以上五種處理都會使HepG2細胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，激活未折疊蛋白反應(yīng)。且無亮氨酸培養(yǎng)基處理細胞2h時，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白ATF4（細胞質(zhì)中）、ATF6α（細胞核中）和XBP1（細胞核中）表達水平較對照組升高（

6、P＜0.01），無亮氨酸培養(yǎng)基處理細胞4h時，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達水平較處理2h組下降(P＞0.05)。3.HepG2細胞經(jīng)亮氨酸饑餓后重新補充亮氨酸，用Western blot檢測ATF4和ATF6α的表達情況發(fā)現(xiàn)，補充亮氨酸（其終濃度為10mM）后，細胞核中ATF4和ATF6α的表達量均下降（P＜0.05），表明細胞中因亮氨酸缺失誘導的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有所緩解;用不同亮氨酸水平日糧飼喂仔豬后，Western blot檢測其肝臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)