煙草花葉病毒弱毒疫苗的研制及其分子生物學.pdf

1、福建農(nóng)林大學博士學位論文煙草花葉病毒弱毒疫苗的研制及其分子生物學姓名：邵碧英申請學位級別：博士專業(yè)：植物病理學指導教師：林奇英謝聯(lián)輝2001.5.1福建農(nóng)林大學博士學位論文接收號分別為：AF395127、AF395128、AF395129)，結(jié)果表明，強、弱毒株基因組均為6395個核苷酸，具有4個開放閱讀框(ORF)，分別編碼126kDa蛋I芻(693419nt1116aa)和183kDa通讀蛋白(694919nt，1616aa)、運動

2、蛋白(49035709nt269aa)、外殼蛋白(5712619Int，159aa)。5’端非編碼區(qū)(NR)為68nt(168m)，通讀蛋白和運動蛋白基因有17個堿基重疊，運動蛋白和外殼蛋白基因間隔區(qū)為2nt(5710571Int)，3’端NR區(qū)為204nt(61926395nt)。TMVW和TMVU1相比，基因組同源率達到98％，TMvw為普通株系。TMV017、TlvlV152基因組核苷酸發(fā)生變異的部位主要在126／183kDa蛋白

3、ORF。和1NⅣw相比，TMv017僅在126kDa蛋白ORF中有18個堿基發(fā)生變異，10個引起氨基酸的變異；而TMV一152在126／183kD蛋白ORF中有16個堿基發(fā)生變異，其中有11個引起氨基酸的變異。TMV017和TMV152有11個共同變異的堿基，其中8個引起氨基酸的變異。TMV152在MPORF中有1個堿基引起氨基酸的變異。其它區(qū)域，三者完全相同。首次嘗試將弱毒株的缺失復制酶基因轉(zhuǎn)化煙草。構(gòu)建了含TMVW、TMV017各2

4、個126kDa蛋白ORF的部分片段，E1E2(8732813nt)、R1E2(692813nt)的植物表達載體。經(jīng)農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒介導轉(zhuǎn)化煙草。再生植株總DNA的Southern點雜交檢測結(jié)果初步表明，4個片段均己整合到煙草基因組中。再生植株總RNA的RTPCRSouthern點雜交檢測結(jié)果初步表明，4個片段均有轉(zhuǎn)錄。用含ndVWE1E2的重組克隆和載體pGEX2T，構(gòu)建了重組原核表達載體，誘導表達出融合蛋111(94kDa)，制各了抗血