兩種泥鰍中CYP19基因的克隆與時(shí)空表達(dá).pdf

1、本文根據(jù)已知硬骨魚細(xì)胞色素P450芳香化酶CYP19基因序列設(shè)計(jì)兩套嵌套簡(jiǎn)并引物，用巢式PCR擴(kuò)增并克隆出了兩種泥鰍的CYP19a和CYP19b的DNA片段。其中，泥鰍CYP19a片段和大鱗副泥鰍CYP19a片段分別長(zhǎng)941bp和935bp；泥鰍CYP19b片段和大鱗副泥鰍CYP19b片段分別長(zhǎng)1337bp和1473bp。所得序列輸入Genbank進(jìn)行同源性檢索，其最高同源性分別對(duì)應(yīng)于DrCYP19a(88.1％)、DrCYP19a(8

2、8.1％)、OnCYP19b(73.1％)、OnCYP19b(74.5％)，依據(jù)CYP19基因的命名規(guī)則，將其分別命名為MaCYP19a、PdCYP19a、MaCYP19b、PdCYP19b。在此基礎(chǔ)上用各自的特異引物克隆出兩種泥鰍CYP19的相應(yīng)cDNA片段。通過(guò)基因組DNA和cDNA序列的比較證明兩種泥鰍的CYP19a基因均包含2個(gè)內(nèi)含子和3個(gè)外顯子，編碼的蛋白質(zhì)序列長(zhǎng)84氨基酸殘基；而兩種泥鰍的CYP19b基因均包含三個(gè)內(nèi)含子和四

3、個(gè)外顯子，編碼的蛋白質(zhì)序列長(zhǎng)145氨基酸殘基。 以GAPDH基因?yàn)閰⒄?，分別對(duì)2種泥鰍成體組織和不同發(fā)育階段的胚胎進(jìn)行了CYP19a和CYP19b基因的半定量RT-PCR表達(dá)分析。結(jié)果表明，CYP19a在兩種泥鰍成體組織中具有大致相似的表達(dá)模式，在卵巢和腦組織中表達(dá)量較大，在精巢和肝組織中微量表達(dá)；在胚胎中二者的表達(dá)模式差異較大，泥鰍CYP19a在原腸期表達(dá)量最高，其次是神經(jīng)胚、尾芽期，大鱗副泥鰍CYP19a在卵黃吸收期表達(dá)量最