地中海貧血的產(chǎn)前篩查與診斷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：地中海貧血(thalassemia，簡(jiǎn)稱地貧)是人群中最常見的不完全顯性的慢性溶血性貧血病，雖屬單基因遺傳，但所涉及的α、β珠蛋白基因表達(dá)調(diào)控復(fù)雜并具有只在紅系造血細(xì)胞中表達(dá)的較高組織特異性，需要精確調(diào)控以保證α/β珠蛋白合成比趨向平衡，而且需要的表達(dá)量很大，使治療困難。無(wú)明顯癥狀的地貧攜帶人群婚配就可能孕育地貧純合子或雙重雜合子，α或β珠蛋白的兩個(gè)基因位點(diǎn)都受到影響而出現(xiàn)中、重型地貧患兒，呈珠蛋白合成障礙的進(jìn)行性致死性貧血

2、，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力。 重慶市屬地貧高發(fā)區(qū)，地貧產(chǎn)前遺傳篩查就是針對(duì)無(wú)明顯貧血癥狀的攜帶者人群，即檢出隱性地貧孕婦，對(duì)夫婦雙方均為地貧基因雜合子進(jìn)行產(chǎn)前咨詢和產(chǎn)前診斷有很好的預(yù)測(cè)作用，并提供了可選擇的手段，從而實(shí)現(xiàn)婚育監(jiān)控、預(yù)防中度地貧、杜絕重型地貧患兒。本研究通過(guò)分析孕婦、配偶乃至胎兒血液學(xué)指標(biāo)與地貧各基因型間的關(guān)系，建立地貧常規(guī)的產(chǎn)前篩查和基因診斷方法，對(duì)妊娠三個(gè)月后胎兒的中、重型地中海貧血進(jìn)行產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)

3、診斷，降低圍生兒出生缺陷，確保母胎健康和出生質(zhì)量，提高人口素質(zhì)。 方法：在本院所有產(chǎn)前檢查人群中進(jìn)行廣泛的血液學(xué)常規(guī)檢查，紅細(xì)胞參數(shù)異常者進(jìn)一步血清鐵、血紅蛋白電泳分析，陽(yáng)性病例進(jìn)行跨斷裂點(diǎn)聚合酶鏈反應(yīng)(gap-PCR)、反向斑點(diǎn)雜交(PCR-RDB)檢測(cè)珠蛋白基因，確診地貧后查配偶紅細(xì)胞參數(shù)、基因分析；夫婦攜帶地貧基因則抽取臍帶血或羊水快速對(duì)胎兒基因型做出明確的產(chǎn)前診斷，適時(shí)終止妊娠，降低圍生期母胎風(fēng)險(xiǎn)；疑似β地貧夫婦行β基因

4、突變熱點(diǎn)測(cè)序、比對(duì)，探測(cè)可能存在的未知突變。 結(jié)果： (1)篩查2310例孕婦，確診α地貧11例、β地貧58例、α/β雜合子3例、β/β雜合子1例，夫婦分別患α、β地貧2對(duì)，同患α地貧1對(duì)、β地貧2對(duì)；重型地貧患兒2例，引產(chǎn)后再次行臍血基因診斷，符合率為100％；本次篩查人群α地貧發(fā)生率0.61％(11十3/2310)、β地貧發(fā)生率2.68％(58+3+1/2310)； (2)紅細(xì)胞參數(shù)平均血紅蛋白(MCH)在各

5、基因型之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；血紅蛋白(Hb)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、紅細(xì)胞數(shù)(RBC)在α、β(α地貧復(fù)合β地貧雜合子)、β三者兩兩之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但三者與β/β(β地貧雙重雜合子)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、血紅蛋白A2(HbA2)在α、α/β、β三者與β/β差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且RDW在α、α/β與β間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，HbA

6、2在α與β之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)； (3)β地貧以CD41/42(-CTTT)、IVS-II-654(C→T)、CD17(A→T)、CD26(G→A)最常見，其次為CD71/72(+A)、CD27-28(+C)；α地貧多見--SEA/aa，非缺失型ααcs、ααQS也不少； (4)疑似β地貧的15個(gè)樣本中，11個(gè)出現(xiàn)2～5個(gè)CD2、IVS-II-16、IVS-II-74、IVS-II-654、IVS-II-

7、666多態(tài)性位點(diǎn)(SNP)，IVS-II-654C→T的SNP能引起剪切突變型β°地貧，此類樣本再次PCR-RDB見突變探針顯色，補(bǔ)充診斷為IVS-II-654雜合子。 結(jié)論： (1)紅細(xì)胞參數(shù)和定量血紅蛋白電泳是篩查地貧的重要指標(biāo)，產(chǎn)檢孕婦進(jìn)行必要的、系統(tǒng)的血液學(xué)篩查是監(jiān)控同型地貧夫婦孕育、杜絕重癥地貧兒的首要措施； (2)gap-PCR、PCR-RDB、基因測(cè)序可快速明確母胎地貧基因型，有效干預(yù)地貧出生缺陷；