缺失型α-地中海貧血基因診斷芯片及在分子流行病學研究中的應用.pdf

1、α-地中海貧血是世界上最常見的單基因遺傳病，也是我國南方各省最常見、危害最大的遺傳病。本病是由于第16號染色體短臂末端α-珠蛋白基因缺陷所致，有缺失型和非缺失型兩種，缺失型是主要類型。在廣東人中，超過96％的α-地中海貧血是由東南亞缺失(--SEA)、左側缺失(-α4.2)和右側缺失(-α3.7)引起。本病尚無有效治療方法，攜帶者篩查及產(chǎn)前基因診斷是唯一防止新的患兒出生、提高人口素質(zhì)的有效措施。實施該措施的前提是對人群中α-地中海貧血的

2、流行病學的了解和相應的診斷技術的建立。
　　目前，多種分子診斷技術已用于α-地中海貧血的診斷檢測。其中多重Gap-PCR已廣泛用于α-地中海貧血的分子篩查和臨床診斷，但其在檢測陳舊DNA時尚有一定局限性?；蛐酒夹g已用于多種遺傳性疾病的診斷和研究。該技術可為α-地中海貧血的分子診斷提供進一步發(fā)展完善的可能。因此，本課題將研制一種可用于臨床的、具有穩(wěn)定性好、重復性高的快速檢測中國人中常見的三種缺失型α-地中海貧血的基因芯片。

3、>　　在參照國內(nèi)外文獻的基礎上，我們首先設計了特異性的PCR引物，建立并優(yōu)化了PCR反應體系和條件。我們也設計了一系列長短不同的特異性的探針。在對醛基片的質(zhì)量、探針的合成、點樣液成分、探針濃度、雜交和洗滌等條件進行了研究比較后，我們獲得了最適合的制備工藝和條件，并制備了含有70個寡核苷酸的探針的芯片。通過對臨床標本的檢測，設定了檢測信號的判定標準：僅信噪比大于10，并且信號強度大于1000的探針才被認為是陽性的；如果-α3.7探針檢測為

4、陽性，那么α2的信號值必須大于-α3.7的一半時才能被判定為陽性。
　　在上世紀八十年代使用血液學方法對全國范圍的地中海貧血的流行病學研究結果對地中海貧血的預防起了巨大的作用。但是伴隨我國經(jīng)濟高速發(fā)展的大規(guī)模的人口移動以及幾十年來對地中海貧血的有效防治，我國人群中地中海貧血的流行病學可能發(fā)生變化。同時，血液學研究的結果與實際情況可能有偏差，需要從基因水平進一步驗證和核實。因此，新一輪的基于分子分析的全國范圍的地中海貧血流行病學的調(diào)

5、查研究勢在必行。這將是一個浩大的工程。一個小規(guī)模具有代表性的人群中地中海貧血流行病學的調(diào)查研究，將具有積極意義。深圳作為一座移民城市，其人口來源于全國各地，深圳市人群中地中海貧血的流行病學對于全中國人群有一定的代表性。因此，我們也進行了深圳市人群中地中海貧血流行病學的研究。
　　使用自制的芯片我們對廣東省深圳市人群地中海貧血的分子流行病學進行了調(diào)查。在檢測過程中，我們檢測到了一例特殊的病例，病人--SEA、?α3.7和α2均為陽性

6、。血液血表型表現(xiàn)為典型的α-地中海貧血特點。通過分子分析鑒定其為HKαα和--SEA的復合雜合子。病人母親基因型也為HKαα/--SEA，其父親基因型為αα/--SEA。據(jù)我們所知，這是首次報道HKαα和--SEA的復合雜合子。由于HKαα/--SEA有典型的α-地中海貧血特點，與αα/--SEA的臨床表型一致，因此在HKαα和αα之間并無明顯的血液學和臨床差異。這也反映了HKαα與αα基因序列的一致性。
　　通過對到深圳幾家大的

7、醫(yī)院就診和尋求產(chǎn)前咨詢的3713個人進行了表型篩查和基因分析，我們獲得了深圳市人群中地中海貧血的流行病學和突變譜帶。深圳人口地中海貧血基因攜帶率為6.49%，其中α-地中海貧血為4.34%，β-地中海貧血為1.99%；α-地中海貧血和β-地中海貧血雙重雜合子0.16%。較廣東省其他地區(qū)的低。這可能與深圳市人口多為外來移民有關。我們共檢測到3種缺失型α-地中海貧血突變、1種非缺失型α-地中海貧血點突變和9種β-地中海貧血。與廣東省其他地區(qū)