二代測序技術(shù)檢測地中海貧血多種突變的研究.pdf

1、地中海貧血又稱珠蛋白生成障礙性貧血，早期的病例來自地中海地區(qū)，故稱為地中海貧血，是世界范圍內(nèi)影響最大的單基因病之一，遵循孟德爾遺傳定律。該病是由珠蛋白基因的缺失或點(diǎn)突變所致，根據(jù)其變異的肽鏈可分為α地貧和β地貧。由于其基因缺陷的復(fù)雜、多樣，使缺乏的珠蛋白鏈類型、數(shù)量、臨床癥狀變異較大。臨床上對中、重度地中海貧血無行之有效的治療方法，給社會(huì)、家庭、個(gè)人帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)及精神負(fù)擔(dān)。故有效檢出地中海貧血患者、進(jìn)行婚前孕前指導(dǎo)、產(chǎn)前診斷、避免地

2、中海貧血患兒的出生，有著極其重要的社會(huì)意義。
　　目前臨床上常用的初篩方法主要有血常規(guī)和紅細(xì)胞脆性實(shí)驗(yàn)、毛細(xì)管電泳、高效液相色譜分析法，血液學(xué)結(jié)果不能確診是否患有地中海貧血，確診仍需基因診斷。目前臨床上廣泛應(yīng)用的地中海貧血基因診斷方法基本是以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，其基本原理是根據(jù)特異引物、探針來檢測珠蛋白基因突變和缺失。主要有跨越斷裂點(diǎn)PCR技術(shù)、反向斑點(diǎn)雜交、突變擴(kuò)增阻滯系統(tǒng)、高分辨率溶解曲線分析技術(shù)、多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)、基因芯片

3、等。上述集中基因診斷方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，其共同點(diǎn)是只能檢測已知突變，對未知突變尚無能為力?；诟髟\斷方法的利弊優(yōu)缺及實(shí)驗(yàn)條件等客觀要求，在選擇診斷方法時(shí)，應(yīng)綜合考慮，以選出最適合的方法。
　　在對2013年1月至2014年8月來我院住院或門診的患者以及和健康體檢人員進(jìn)行地中海貧血基因檢測的3715份病例分析發(fā)現(xiàn)，血常規(guī)異常組中，還是有一定比例的地中海貧血基因檢測陰性。雖然這些年分子診斷技術(shù)發(fā)展迅速，相關(guān)分子診斷如地中海貧血基因檢測技術(shù)

4、也日益成熟，但并不能檢測所有地中海貧血所有突變位點(diǎn)，存在臨床地中海貧血漏篩，導(dǎo)致地中海貧血高危兒的出生的風(fēng)險(xiǎn)。
　　近些年來，高通量測序技術(shù)得到迅猛發(fā)展，該技術(shù)能一次并行對幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定，具有通量高、速度快的優(yōu)點(diǎn)。隨著其成本不斷降低、技術(shù)不斷完善，已被廣泛應(yīng)用于臨床及科研研究。提示我們可將有關(guān)技術(shù)應(yīng)用到具體臨床中檢測地中海貧血多種突變，本論文主要對二代測序檢測地中海貧血方法建立及可行性評估進(jìn)行研究。本試驗(yàn)共